导  语

截至目前，全球已累计约500万人次感染新型冠状病毒。在当前新型冠状病毒肆虐的大背景下，新疫苗、新治疗药物由于需经过较长周期的临床试验以确保其安全性，无法迅速应用于临床；因此，老药新用不免为一种积极尝试，硫酸羟氯喹（Hydroxychlorquine sulfate，CAS#：747-36-4）即是其中一种。

硫酸羟氯喹于1955年在美国上市，目前已在加拿大、法国、德国、澳大利亚、中国、日本等70多个国家获得批准。最初硫酸羟氯喹被用于治疗疟疾，后来临床发现此药物具有轻度免疫抑制和免疫调节的作用。自新冠肺炎疫情在全球扩散以来，有部分临床研究报道硫酸羟氯喹对于新型冠状病毒感染患者有效；此外,美国总统特朗普在多个官方场合亲自“带货”，更是引发了美国、印度、巴西、新加坡等国对于硫酸羟氯喹的热潮。

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为了规范用药、减少用药安全问题，美国FDA于3月28号发布了硫酸羟氯喹用于治疗COVID-19住院患者的紧急使用授权，并在4月14日发布了硫酸羟氯喹的BE指南。

尽管目前仍无确凿研究表明硫酸羟氯喹可以对抗新冠病毒，但世界各国对硫酸羟氯喹及其原料药（API）的关注度已逐渐升温。印度是硫酸羟氯喹最大的生产国之一，约占全球供应量的一半。此前印度已经批准该药用于预防新冠病毒感染，目前已经向全世界上百个国家出口了8000多万片硫酸羟氯喹。随着印度近期将该药列入禁止出口原料药名单的事件发酵，硫酸羟氯喹及相关原料供货价格已疯涨。硫酸羟氯喹生产国的产能及出口规模在短期内呈现出爆发增长；有消息报道，自3月20日以来，国内某制药厂商生产的硫酸羟氯喹，5天内已出口原料药4.9吨。

为了应对预期增长的药品质量控制及临床药物浓度监测需求，本文遵照EP10.0（欧洲药典）、USP43（美国药典），开发了硫酸羟氯喹有关物质、硫酸羟氯喹片含量测定的HPLC（以及UHPLC）方法；此外参考FDA关于生物样品分析指导原则及硫酸羟氯喹BE指南，开发了LCMS-8050监测人血浆中硫酸羟氯喹含量的测定方法。

1.EP方法测试硫酸羟氯喹有关物质（使用超高效液相色谱系统LC-30A或同等型号）

EP10.0中要求杂质C与硫酸羟氯喹、杂质B与杂质C分离度均需≥3.0。

图1. 硫酸羟氯喹有关物质色谱图

结果显示，杂质C与硫酸羟氯喹、杂质B与杂质C分离度完全满足要求。

2.USP方法测试硫酸羟氯喹片含量（使用高效液相色谱系统LC-2040C 3D或同等型号）

图2. 硫酸羟氯喹与磷酸氯喹标准样品色谱图

结果表明硫酸羟氯喹与磷酸氯喹分离度为3.728，完全满足要求。

3. LCMS-8050测定人血浆中硫酸羟氯喹含量

人血浆样品经乙腈沉淀蛋白后离心取上清进样分析，硫酸羟氯喹在0.5~500 ng/mL范围内线性良好，相关系数大于0.998；方法定量限为0.5 ng/mL；硫酸羟氯喹低、中、高浓度样品日内精密度在1.57~8.33 %之间；准确度在97.91~106.02 %之间；硫酸羟氯喹低、中、高浓度样品及内标的基质效应在98.31~108.17 %之间；使用LCMS-8050三重四极杆液质联用系统可在10 min内对血浆中硫酸羟氯喹含量进行测定。

图3. 空白血浆及含硫酸羟氯喹血浆样品（200 ng/mL）                 图4. 空白血浆及含磷酸氯喹血浆样品（100 ng/mL）

LC-2030/2040 series                                              LC-40

LCMS-8050

采用岛津液相色谱系统，依照EP10.0方法及USP43方法，可以很好的对硫酸羟氯喹原料药及其制剂质量控制的要求；在全球硫酸羟氯喹需求激增的背景下，保证药品质量。在此基础上开发的LCMS-8050监测人血浆中的硫酸羟氯喹含量，则是为了进一步结合临床指标，准确评价硫酸羟氯喹在人体内的药效及相互作用，指导更加合理、安全用药。无论结果如何，候选药物在质量控制及临床试验等高质量研究中的表现都值得被了解和不断完善。我们将继续关注更多科学证据的揭晓；同时更期冀在创新科技力量的推动下，新冠病毒能早日被有效遏制。