导读

需要冷冻样品切片的制作

• 核心设备：冷冻切片机，需提前调试温度控制系统与刀架稳定性。

• 专用耗材：ITO镀层导电载玻片、导电双面胶、硅胶盒、干燥器。

• 辅助工具：干净镊子、毛刷、离心管、液氮（或干冰）等。

• 包埋剂：推荐10%明胶水溶液或1-2%CMC水溶液。

• 动物样本：优先选择新鲜组织，可使用干冰法冷冻，直接使用液氮速冻可能导致切片破裂等问题。使用液氮冻结时可以使用异戊烷等试剂进行缓冲，避免样品直接接触液氮。

• 植物样本：花、叶用新鲜样品；根、茎、果实、种子等根据硬度选择新鲜、干燥或冻结样品。

根据样品大小与结构决定是否对样品进行包埋，核心是避免组织变形，且便于切片。尽量不包埋，减少包埋对样品的影响。

• 如果是结构均匀的组织，如脑、肝、肾、肿瘤等较大的实体组织，冷冻后可以直接切片，则不需要包埋。

• 如果是带有空腔或体积较小的样本（如血管、眼球）或不方便直接切片的，为保持形状以及便于切片则建议包埋后再切片。

切片厚度一般来说越薄越好，但是过小的厚度难以保持切片的完整性，且可能导致分析物总量较少。进行质谱成像时，动物组织样品切片一般在10 μm，或保持在20 μm以内有利于提高样品的成像质量。植物组织样品常见10-20 μm左右，部分样品特别是硬度较大的植物样品可考虑更厚的切片（20-30 μm，甚至40 μm），含水/多汁组织应适当提高切片厚度，如15-25 μm。

1. 切片之前，需使用乙醇擦拭冷冻切片机刀片，以除去刀片上可能残存的油脂；

2. 切片温度根据样品需进行调整，一般使用-20℃，不同样品可能会需要进行调整才能获得均匀、平整的切片；

3. 将冷冻样品固定在底座，转动手轮，先修块再正式切片，用洁净毛刷轻取切片，转移至ITO载玻片中央（避开边缘区域）；

4. 剩余切片干燥后放入50 mL离心管中，置于-80℃保存。

   
   

   
   

   视频1：修块、正式切片及切片转移操作

   视频请点击查看：https://mp.weixin.qq.com/s/boKvxOYEjNrPGchl3KA3Pw

   
   

   
   

   视频2：切片保存操作

   视频请点击查看：https://mp.weixin.qq.com/s/boKvxOYEjNrPGchl3KA3Pw

   
   

   

视频中特别演示了防卷板操作、刀片角度调节等关键细节，新手上路一定要重点关注，这些操作直接影响切片完整性！

                                                                                                              

图2. 单根头发纵向切割过程^[2]

结语

参考文献

[1] Jiaman Lin, et al. Natural or artificial: An example of topographic spatial distribution analysis of mescaline in cactus plants by matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry imaging [J].Frontiers in Plant Science, 2023, 14:1066595.DOI: 10.3389/fpls.2023.1066595.

[2] Jiao-Jiao Ji, et al. Estimation of the time of zolpidem intake and differentiation between consumption and external contamination using MALDI-MSI for investigations on single hair samples [J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2024, 248, 116272. DOI: 10.1016/j.jpba.2024.116272. 

撰稿人：陈梦宣

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